Колориметричен метод за химичен анализ на кръвта

Колориметричен метод: анализ, основан на сравнението на наситеността на цвета на изпитваното съединение с тази на известно съединение. Резултатите от физико-химичните тестове са от голяма полза за много клонове на науката, но изследването се използва най-вече в медицината.

Същност на колориметричния метод

Съществуват много видове тестове, които могат да се използват за определяне на химичния състав на веществата. Някои от тях са универсални и широко използвани в най-различни области, а други са специфични, по-точни. Колориметричният метод е един от най-универсалните.

Същността на анализа се състои в това, че наситеността на цвета на разтвор с неизвестна концентрация се сравнява с цвета на стандартен разтвор. По време на анализа взаимодействието на изпитваното съединение със специфичен реактив води до образуването на цветно съединение. След приключване на реакцията полученият цветен оттенък се сравнява с цвета на разтворите, чиято концентрация вече е известна.

Смята се, че основателят на колориметрията Робърт Бойл е. Той използва изстискване на танини, за да разграничи желязото от медта в разтвор. Това беше Бойл обърна внимание на.., Колкото по-висока е концентрацията на желязо в разтвора, толкова по-наситен е нюансът на последния.

Колориметрия

Колориметрията е метод за определяне на количеството на дадено вещество в разтвори. В основата на анализа е законът на Бугер-Ламбер-Бера: когато светлинен лъч попадне в плътен, поглъщащ слой от материал, интензитетът му намалява.

Колориметричният метод за определяне на концентрацията на дадено вещество може да използва визуално сравнение или сравнение с помощта на специални инструменти за измерване на интензивността на цвета. Сравнението се прави по прекия и компенсационния метод.

1. Директно. Тя включва сравняване на цвета на изпитвания разтвор при определена плътност и температура с референтен разтвор. Във фотоколориметрите и спектрофотометрите като референтен разтвор се използва дестилирана вода. Устройствата измерват интензитета на тока, който зависи от интензитета на светлината.
2. Компенсация. Тя се основава на цветовото съответствие на тестовата проба с референтна проба. резултатът се постига чрез добавяне на разтворител или чрез увеличаване на височината на слоя оцветяваща среда.

Използването на спектрофотометър, монохроматор и други прецизни инструменти допълнително опростява и без това несложния метод на изследване и ви позволява да увеличите точността на резултатите си. Тези инструменти могат да измерват пропускането на светлината и да определят дължината на вълната.

Къде да се прилага анализът

Колориметричният анализ се използва, когато точният химичен състав е известен, има референтна проба за сравнение и температурата на тестовата и референтната проба е еднаква. Когато количеството на оцветено вещество трябва да се определи бързо, но количеството е толкова малко, че не може да се приложи аналитичен метод.

Колориметрията намира широко приложение в медицината, в клиничните биохимични изследвания и в други области:

• Фармацевтична индустрия;
• Хранително-вкусова и алкохолна промишленост;
• агрономия (определяне на качеството на почвата).

Предимства и недостатъци

Колориметричният метод, както и всеки друг, има предимства и недостатъци.

Предимствата включват следното

• Лесни за извършване тестове, минимални подготвителни процедури;
• Тестването може да се извършва дори с малки количества материал за изпитване;
• Не е необходимо скъпо оборудване, въпреки че използването на модерни устройства, които не са евтини, става все по-често срещано. Но те осигуряват най-точния резултат.

Недостатъци: ниска аналитична точност в сравнение с аналитичните методи.

Метод на Биурет за определяне на протеини

Серумният протеин е показател за състоянието на хомеостазата. Повишена концентрация Съединение с високо молекулно тегло в кръвта се нарича хиперпротеинемия, а ниските нива - хипопротеинемия.

Протеините в кръвния серум имат различен състав, структура, свойства и изпълняват различни функции. Те могат да бъдат ензими, хормони, имуноглобулини и др. На всички групи протеини са присъщи редица общи характеристики, въз основа на които са разработени методи за определяне на високомолекулни органични съединения в биологични течности.

От всички методи в клиничната биохимия най-често се използват колориметричните методи за определяне на протеини. Те са сравнително евтини, което е важно за Те реагират с натриев сулфат. и са съвсем прости. Най-разпространен е методът на Бюре. Същност на метода: Протеини в Алкална среда Те реагират с меден сулфат, като образуват лилави съединения. Съдържанието на белтъчини в кръвта се определя от наситеността на петното. Biomaterial се приема сутрин на гладно.

Тестът е много точен, но има фактори, които влияят на концентрацията на протеини в кръвта:

• Физическа активност малко преди вземането на проби от биоматериали;
• Последните седмици на бременността и периодът на кърмене
• употребата на кортикотропин, мисклейрон, клофибрат води до увеличаване на кръвния протеин, докато употребата на пиразинамид и естроген води до намаляване на концентрациите;
• Неправилно позициониране на ръцете по време на вземането на проби от биоматериали.

Определяне на желязото

Количеството желязо в кръвта е един от основните фактори за диагностициране на различни заболявания. Веществото е концентрирано в хемоглобина, който осигурява преноса на кислород до тъканите. За определяне на желязото по колориметричен метод най-често се използва разтвор на батофенантролин (0,02%) като основен реактив. Биоматериал - серум без следи от хемолиза.

Същност на метода: Взаимодействието на двувалентни железни йони и сулфатиран батофенантролин образува цветен комплекс, чиято наситеност се определя фотометрично. За да се получи бистър разтвор, трябва да се спазват правилата за събиране на биоматериали, но за точно определяне на оптичната плътност на комплексите желязо-лиганд, желязото се освобождава от хемоглобина с хидроксиламин и детергенти (натриев додецилсулфат). Резултатът от теста определя наличието и степента на патология. Нормалната концентрация на желязо трябва да бъде:

• 14,2 - 26,0 µmol/l (мъже)
• 10,6- 21,7 µmol/l (жени).

Недостигът на желязо обикновено се дължи на загуба на кръв, недостатъчен прием или лоша абсорбция в стомашно-чревния тракт.

Определяне на холестерола

Холестеролът е органично вещество, което се намира в клетъчната мембрана на много организми, включително и на хората. Той е необходима за производството на Холекалциферол и стероидни хормони. За нормални се смятат нива на холестерола от 3,37-5,2 mmol/l. Повишени нива - една от основните причини за атеросклероза.

Колориметричните методи за определяне на холестерола позволяват ранно откриване на съдови заболявания. Според патологично-анатомичните находки при летална исхемия концентрацията на липофилен алкохол при пациентите е била 6,5-7,8 mmol/l.

Колориметричният метод се основава на принципа, че холестеролът се окислява от 3бета-хидрокси стероидната оксидоредуктаза, при което се отделя водороден пероксид, който превръща р-аминоатипирина в цветно съединение. Холестеролът се определя по наситеността на цвета му.

При теста за кърмачета концентрацията на холестерол при децата не трябва да надвишава 4,1 mmol/l.

Какво представлява ензимният колориметричен метод??

Ензимните тестове се основават на използването на реакции с високоактивни ензими. Широко използван в аналитичната химия за определяне на вещества от нитратни йони до макромолекули.

Ензимните методи се характеризират със специфичност, която позволява да се анализират някои вещества в присъствието на подобни вещества. Най-разпространеният метод се основава на ензима глюкозооксидаза. Тестът се използва за определяне на концентрацията на глюкоза в кръвта. Точността на теста позволява да се използва за коригиране на дозата на хипогликемичните лекарства при пациенти с диабет тип 2.

Методът на глюкозния оксидант се счита за един от най-добрите количествени методи за определяне на глюкозата. Като биоматериал може да се използва кръв (капилярна) или серум, но плазмата е за предпочитане, тъй като има по-ниско ниво на хематокрит, което влияе отрицателно върху точността на резултата.

Кинетичният фотометричен метод се използва основно. Основната идея е, че в зависимост от съотношението между глюкозооксидазата и пероксидазата за определен период от време след началото на реакцията скоростта на образуване на оцветеното съединение е пропорционална на нивото на глюкозата в пробата. Основното предимство на теста е, че резултатът от него не се влияе от наличието на чужди съединения в пробата. Методът има недостатък - за провеждането на теста са необходими скъпи измервателни уреди от немски или шведски производители.

Заключение

Колориметричният метод се характеризира с точност и лекота на използване. Използването му в медицината позволява ранно откриване на различни патологични промени в организма. С въвеждането на нови технологии методът се усъвършенства и става все по-популярен.